돼지 생식기호흡기증후군 바이러스(PRRSV)의 면역억제 특성은 효과적인 방제에 있어 주요 장애 요인으로 남아 있습니다. 기존의 마이크로RNA(miRNA) 기반 항바이러스 접근법은 효능이 제한적이고 바이러스 회피 위험성이 높다는 단점이 있습니다. 본 연구에서는 RIG-I 기반의 선천성 면역 활성화와 서열 특이적 유전자 침묵 기능을 하나의 분자 내에 통합한, 5'-트리포스페이트(5'-PPP) 말단을 갖는 엔지니어드 miRNA를 설계하였습니다. 체외 전사된 5'-PPP miRNA는 패턴 인식 수용체 RIG-I에 의해 효과적으로 인식되어, PRRSV에 의한 면역억제에 대응하는 강력한 1형 인터페론 반응을 유도합니다. MARC-145 세포에서는 5'-PPP BZL-sRNA-20이라는 콘스트럭트가 면역 활성화와 유전자 침묵이 시너지 있게 작용하여 PRRSV 복제를 강력하게 억제하였습니다. 하지만 PRRSV의 실제 숙주 세포인 돼지 폐포 대식세포(PAMs)에서는 항바이러스 효과가 주로 5'-PPP 기반 인터페론 반응에 의존하였으며, 타겟 서열의 기여도는 제한적이거나 세포 환경에 따라 달랐습니다. 듀얼-루시퍼레이스 분석에서는 유전자 침묵 활성은 5'-PPP 수식에 의존하며, 이 수식은 BZL-sRNA-20의 안정성을 높이는 것으로 확인되었습니다. 이와 같은 이중기능적 전략은 ‘면역 활성화 및 타겟팅’이라는 패러다임을 확립하는 것으로, RIG-I 리간드로서 광범위한 항바이러스 반응을 일으킴과 동시에, PRRSV 유전체의 보존된 부분에 직접 상보 결합하여 바이러스 RNA를 특이적으로 절단합니다. 본 연구는 엔지니어드 5'-PPP miRNA가 면역조절 기반 항바이러스제로서의 가능성을 밝혀내는 한편, RNAi 기반 타겟팅의 효과가 세포 환경에 따라 달라질 수 있음을 강조합니다.