돼지 위 상피세포(PGECs)는 위의 분자적·병원성 기전을 연구하는 데 유용한 모델입니다. 하지만 PGECs는 분리의 어려움, 짧은 수명, 제한적인 증식력 등 한계를 가지고 있습니다. 이를 극복하기 위해 본 연구에서는 불사화된 PGECs(i-PGECs)를 확립하여 병원체 감염 기전의 in vitro 연구를 가능하게 했습니다. 1차 PGECs는 여러 효소(dispase II, collagenase I, hyaluronidase)를 단계적으로 처리하여 산 분비선에서 분리하였습니다. 불사화는 SV40T(유인 바이러스 40 대형 T 항원) 및 hTERT(인간 텔로머레이즈 역전사효소)를 발현하는 렌티바이러스 벡터를 통해 달성됐으며, qRT-PCR(P < 0.05)로 성공적으로 확인하였습니다. i-PGECs의 상피세포 정체성은 qRT-PCR 및 면역형광법을 통해 CK18, EpCAM, E-cadherin의 안정적 발현으로 입증되었습니다. 또한 i-PGECs는 PGECs의 형태적 및 초미세구조적 특성을 유지하였고, WST-8 분석, 세포사 및 세포주기 분석, 핵형 분석, 투과전자현미경(TEM)을 통해 향상된 증식력을 보였습니다. 텔로미어 길이 분석 및 scratch wound assay에서는 계대배양에 의해 영향받지 않는 안정적인 텔로미어 유지와 일관된 이주 능력이 확인되었습니다. RNA-seq 및 차등 발현 유전자(DEGs) 분석에서는 세포 증식 경로에 관련한 유전자들이 유의하게 상향 조절됨(P < 0.01)이 나타났습니다. Aflatoxin B1(AFB1) 처리 후, i-PGECs는 NPC1, PLAUR과 같은 면역관련 인자들을 유의하게 상향 발현시켰습니다(P < 0.01). i-PGECs에서 CRISPR/Cas9을 이용한 NPC1 유전자 제거는 WST-8 분석에서 AFB1 유도 세포독성에 대한 저항성을 증가시켰습니다. i-PGECs는 50회 이상 계대배양 후에도 안정성을 유지하였으며, 돼지 위 상피의 독성 감염 기전에 대한 신뢰할 수 있는 in vitro 모델로의 활용 가능성을 제시하였습니다.