생식 효율성은 지속가능한 양식업과 생의학 모델 생물의 유지에 필수적입니다. 제브라피쉬(Danio rerio) 정자의 단기 저장은 일상적인 번식 및 정자학 연구에서 매우 중요하지만, 기존 희석제는 사용 가능한 정자의 품질을 24시간 이내로만 보존할 수 있습니다. 본 연구에서는 정장액 특성 분석과 단계적 희석제 선별 및 최적화를 결합하여 냉장 보관 결과를 개선하고자 했습니다. 제브라피쉬의 정장액은 평균 삼투압이 251.4 ± 5.2 mOsmol kg⁻¹, NaCl 중심의 이온 특성(Na⁺ 98 mM, Cl⁻ 122 mM), 중간 수준의 K⁺(29.4 mM), 낮은 Ca²⁺(0.66 mM), pH 7.85를 나타내어 희석제 조성의 생리학적 근거를 제공했습니다. 수컷 제브라피쉬는 극소량의 정액만 생산하기 때문에, 먼저 풀링한 정자를 실험 단위로 유효성을 검증했습니다. 5개의 독립 풀에서 36시간 저장 시 운동성과 속도에서 유의한 차이가 없었습니다(P > 0.05). 희석제 스크리닝(E1-E20) 결과, NaCl ≥ 120 mM 및 40 mM KCl을 포함한 조성이 정자 기능을 가장 잘 보존했으며, 36시간 시점에서 E13 및 E15는 각각 40.67% 및 49.0%의 운동성을 유지하며 가시적인 속도를 보였고, 대조군은 무운동성이었습니다. 추가 최적화(E21-E27)에서 E27(150 mM NaCl, 40 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1 mM MgSO₄, 20 mM Tris, pH 7.5; 약 385 mOsmol kg⁻¹)이 가장 우수함을 확인하였으며, 36시간째 약 52%의 운동성을 보존하고, 속도(VCL 및 VSL)도 다른 모든 처리구에 비해 유의하게 높았습니다(P < 0.0001). 희석제 첨가를 2-4시간 지연할 경우 운동성과 속도의 회복 불가능한 상실이 관찰되어, 즉각적인 이온/삼투압 안정화가 매우 중요함을 시사합니다.