본 연구의 목적은 돼지 Y 염색체를 가진 정자(Y-정자)의 세포막 에피토프를 표적으로 하는 단일사슬 단편 가변형(scFv) 항체를 구축하고 생산하는 것이었습니다. 4D1-E8로부터 클론화된 하이브리도마는 가장 높은 특이성을 보였으며, Y-정자를 사용하여 scFv 유전자를 생성했습니다. 예상되는 450 bp (VH)와 300 bp (VL)의 조합으로 795 bp의 scFv 유전자가 만들어졌습니다. 이 scFv 유전자는 pET22b 발현 벡터에 삽입되어 E. coli BL21 (DE3)에서 발현되었습니다. 결과적으로 H4:L4 클론은 Y-정자에 대한 높은 특이성을 가진 scFv 항체를 생산했습니다. H4:L4 scFv 항체의 돼지 Y-정자에 대한 반응성은 ELISA와 유세포 분석을 통해 확인되었습니다. H4:L4 scFv 항체는 X-정자에 대한 낮은 교차 반응성(4.14%)을 보였습니다. 용해 가능한 H4:L4 scFv 항체는 4D1-E8 mAb보다 X-정자에 대한 교차 반응성이 현저히 낮았습니다(4.14% 대 15.5%). 그러나 H4:L4 scFv와 4D1-E8 mAb는 다른 일반적인 가축 정액에 대해서는 높은 교차 반응성을 보였습니다. scFv 항체와 mAb는 면역형광을 통해 Y-정자의 표면에서 검출되었고, 형광 강도가 특히 Y-정자의 세포막에서 강하게 나타났습니다. 본 연구에서는 돼지 Y-정자에 대한 scFv 항체의 생산이 성공적으로 이루어졌으며, 이는 새로운 업적을 나타냅니다. 이 scFv 항체는 돼지 Y-정자에 대한 높은 친화력을 보였습니다. 용해 가능한 scFv 항체와 mAb는 X 또는 Y 염색체를 지닌 돼지 정액을 포함하는 처리에서 Y-정자 및 X-정자를 분리하는 데 사용될 수 있습니다.