아프리카돼지열병 바이러스(ASFV)에 감염되면 돼지에서 급성의 치명적인 질병을 유발하기 때문에 발병을 효과적으로 관리하기 위해 조기 검출이 시급합니다. 항원적 에피토프를 기반으로 한 간접 효소결합면역흡착검사(ELISA)는 높은 민감도를 제공하지만, 에피토프를 ELISA 플레이트에 고정하는 전통적인 방법이 항체 인식을 방해할 수 있습니다. 본 연구에서는 식별된 p54 항원 에피토프를 핵심 스트렙타비딘(cSA) 기반의 고정 시스템에 통합하여 ASFV 항체를 검출하기 위한 간접 ELISA를 개발했습니다. GST-rp54로 생성된 6G9 단클론 항체(mAb)를 사용하여 ASFV 양성 혈청에 대한 특정 인식을 확인했습니다. p54 내에 보존성이 높은 선형 에피토프가 아미노산 60번에서 79번(A60AIEEEDIQFINPYQDQQQWV79; p5460-79)까지 위치하며 6G9 mAb 결합 부위로 식별되었습니다. cSA를 통해 biotin-PEG4-p5460-79의 고정화는 면역반응성을 크게 향상시켰으며, 6G9 mAb 및 ASFV 양성 혈청에 대해 각각 OD₄₅₀ 값이 0.22(1:800 희석) 및 0.28(1:400 희석) 증가했습니다. 중요한 검사 매개 변수를 최적화한 후, p5460-79 에피토프를 이용한 cSA 기반의 간접 ELISA(cSA-p5460-79-inELISA)를 설립했습니다. 이 검사법은 높은 재현성(변동 계수 3.29-8.76%)과 강력한 특이성을 보여주었으며, CSFV, PCV2, PRRSV, PRV, PEDV, TGEV, PDCoV에 대한 항혈청과 교차 반응이 나타나지 않았습니다. 또한, 상업용 ELISA 키트(한계 1:400)를 능가하여 1:1600까지 희석된 ASFV 양성 혈청(OD₄₅₀ > 0.43)을 감지하는 뛰어난 민감성을 입증했습니다. 수신자 동작 특성(ROC) 분석은 알려진 상태의 샘플(n = 100)을 기반으로 95.5% 민감도와 96.2% 특이성을 나타냈습니다. 결론적으로, 우리는 ASF 검출을 위한 새로운, 특정하고 고감도의 혈청학적 방법을 개발하여 조기 진단을 위한 효과적인 도구를 제공했습니다.