아프리카돼지열병바이러스(ASFV)의 후기 구조 단백질인 pA104R은 히스톤 유사 단백질로 추정되며, DNA 결합 관련 단백질로서 ASFV의 DNA 복제, 전사 및 게놈 포장에 필수적인 역할을 합니다. 그러나 pA104R과 숙주 단백질 간의 상호작용에 대한 분자적 메커니즘은 아직 알려져 있지 않습니다. 본 연구에서는 ASFV-pA104R과 상호작용할 가능성이 있는 단백질을 탐색하기 위해 일차성 돼지 폐포 대식세포(PAM) cDNA를 이용한 효모 이합체 라이브러리를 구축하였으며, 그 결과 돼지 E3 유비퀴틴 리가아제 RING-finger protein 2(RNF2)가 확인되었습니다. RNF2는 ASFV 증식을 특이적으로 음성 조절하는 것으로 나타났습니다. 기작적으로, RNF2는 ASFV-pA104R의 리신 5(K5) 위치에서 K48 연결 유비퀴티네이션을 유도하여 pA104R의 프로테아좀 분해를 촉진함으로써 ASFV 복제를 억제합니다. 추가 연구에서는 K5R 돌연변이가 pA104R과 RNF2 간의 상호작용을 저해하고, RNF2에 의한 pA104R 분해에 저항하는 것으로 나타났습니다. 또한, ASFV CN/SC/2019(야생형) 균주를 기반으로 pA104R 점돌연변이(ASFV CN/SC/2019 pA104R-K5R)를 도입한 변이 바이러스를 생성하였습니다. 연구 결과, ASFV CN/SC/2019 pA104R-K5R은 바이러스 복제 및 독성을 증가시키며, 이는 바이러스 전사 증가 또는 숙주 면역반응 조절과 관련이 있을 수 있음을 시사합니다. 실제로 모계 균주와 비교했을 때, ASFV CN/SC/2019 pA104R-K5R 감염 시 돼지에서 더 높은 병원성과 심각한 병변이 나타났습니다. 결론적으로, 본 연구는 ASFV CN/SC/2019의 pA104R K5 위치 유비퀴티네이션을 매개하는 내재성 항바이러스 단백질 RNF2를 규명하였으며, 이 과정이 바이러스 복제 및 병원성의 중요한 조절 인자임을 제시합니다.