여섯 가지 주요 바이러스 병원체인 돼지유행성설사바이러스(PEDV), 범유행성장염바이러스(TGEV), 돼지로타바이러스(PoRV), 돼지델타코로나바이러스(PDCoV), 위성병진바이러스(PRV) 및 돼지생식호흡기증후군바이러스(PRRSV)는 세계 돼지산업에 상당한 경제적 손실을 초래합니다. 그들의 빈번한 공순환 및 그로 인한 혼합 감염은 신속하고 정확한 진단을 심각하게 복잡하게 만듭니다. 이 문제를 극복하기 위해, 우리는 이들 병원체를 동시에 검출 및 구분하기 위한 고해상도 용융(HRM) 분석이 결합된 멀티플렉스 실시간 PCR 분석을 개발했습니다. 특정 프라이머 세트는 PEDV-M, TGEV-N, PoRV-VP6, PDCoV-M, PRV-gE 및 PRRSV-ORF5 유전자의 보존된 영역을 타겟으로 하여 설계 및 최적화되었습니다. 반응 조건 및 HRM 매개변수가 조정되어 모든 여섯가지 바이러스에 대해 특정한 증폭 및 독특한 용융 프로파일이 보장되었습니다. 이 분석은 탁월한 특이성을 나타내며, 다른 일반적인 돼지 병원체와의 교차 반응성이 없습니다. 검출 한계(LODs)는 다섯 가지 바이러스(PEDV, TGEV, PoRV, PDCoV 및 PRRSV)에 대해 10 복사본/μL, PRV에 대해 100 복사본/μL로 설정되었습니다. 증폭 효율성은 90%에서 102% (R2 ≥ 0.98) 범위였습니다. 높은 재현성은 사이클 임계값(Ct) 값과 용융 온도(Tm) 값에 대한 변동 계수(CV)가 각각 <3% 및 <0.5%인 것으로 확인되었습니다. 248개의 필드 샘플에 대한 임상 검증을 통해 여섯 가지 병원체에 대한 검출률이 기존 PCR 분석보다 평균 18.1%(16.0%~27.3% 증가) 높았음을 보여주었습니다. 이러한 결과는 HRM 기반 멀티플렉스 실시간 PCR 분석이 주요 돼지 바이러스 병원체를 검출하고 구분하는 데 있어 신속하고 민감하며 특이적이며 높은 재현성을 가진 도구임을 확인합니다. 이 방법론은 초기 진단, 역학 감시 및 돼지 바이러스 질병의 향상된 제어를 지원하는 가치 있는 분자 진단 플랫폼을 제공합니다.