이 연구의 목표는 돼지 Y 염색체를 가진 정자(Y-정자)의 원형질막 항원 부위를 표적으로 하는 단일사슬 가변 조각(scFv) 항체를 구성하고 생성하는 것이었습니다. 4D1-E8에서 클론된 하이브리도마는 가장 높은 특이성을 보였으며, Y-정자를 사용하여 scFv 유전자를 생성하였습니다. 예상되는 450 bp (VH)와 300 bp (VL)를 결합하여 795 bp의 scFv 유전자가 도출되었습니다. scFv 유전자는 pET22b 발현 벡터에 삽입되어 E. coli BL21 (DE3)에서 발현되었습니다. 결과로 H4:L4 클론은 Y-정자에 매우 특이적인 scFv 항체를 생산하였습니다. H4:L4 scFv 항체의 돼지 Y-정자에 대한 반응은 ELISA와 유세포 분석을 통해 확인되었습니다. H4:L4 scFv 항체는 X-정자와의 교차 반응성이 낮음을 보였으며 (4.14%), 이는 4D1-E8 mAb (15.5%)보다 현저히 낮았습니다. 그러나 H4:L4 scFv와 4D1-E8 mAb는 다른 전통적인 가축 정액과의 높은 교차 반응성을 보였습니다. scFv 항체 및 mAb는 Y-정자의 표면에서 면역형광 분석을 통해 검출되었으며, 특히 Y-정자의 원형질막에서 강한 형광 강도를 나타냈습니다. 본 연구에서 돼지 Y-정자에 대한 scFv 항체 생산이 성공했으며 이는 새로운 성과로 평가됩니다. 이 scFv 항체는 돼지 Y-정자에 대한 높은 친화성을 가졌습니다. 용해성 scFv 항체와 mAb는 X 또는 Y 염색체를 가진 돼지 정자를 포함하는 처리에 있어 X 및 Y 정자를 분리하는 데 사용할 수 있습니다.