장 상피는 하부의 장 간엽 기질 세포(iMSCs)와 밀접하게 상호작용하여 발달, 항상성 및 재생을 조절합니다. 그러나 돼지 조직에서 상피와 기질 부분을 순차적으로 분리하기 위한 표준화된 방법은 제한적입니다. 이 프로토콜은 돼지의 같은 공장 부위에서 크립트와 iMSCs를 분리하기 위한 최적화된 단계별 프로세스를 설명합니다. 이 방법은 에틸렌다이아민테트라아세트산/디티오트레올(EDTA/DTT) 기반 해리 버퍼를 사용하여 크립트를 방출한 후, 콜라게네이스/디스파제 소화를 통해 세포 외 기질을 분해하여 iMSCs를 분리합니다. 이 접근법은 분리된 세포의 공간적 변화를 최소화합니다. 분리된 크립트는 성공적으로 배양되었으며, 콜라겐 하이드로겔 코팅된 플레이트에서 전형적인 확장형 2차원(2D) 엔테로이드 단일층을 형성했습니다. 배양된 iMSCs는 배양 플라스크에 부착되었고, 면역 염색을 통해 혈소판 유래 성장인자 수용체 알파(PDGFRα) 및 클러스터 오브 디퍼런시에이션 81(CD81) 등의 기질 마커를 발현했습니다. 전반적으로, 이 최적화된 분리 프로토콜은 동일한 돼지 공장 섹션에서 상피와 기질 세포를 확보하여 돼지의 상피-기질 상호작용을 제어하는 메커니즘을 밝히기 위한 장기유사체 및 iMSC 공동 배양 시스템 연구를 위한 재현 가능한 기초를 제공합니다. 이는 인간 생리학을 재현하고 동물 과학을 발전시키는 모델로서 번역적으로 중요합니다.