다중 바이러스 감염은 돼지 질병 관리에 상당한 복잡성을 초래합니다. 아프리카돼지열병바이러스(ASFV), 가짜광견병바이러스(PRV), 돼지파보바이러스(PPV)를 포함한 DNA 바이러스는 모돈의 생식 장애를 유발하며, 겹치는 임상 증상이 구별 진단을 어렵게 만듭니다. 이를 해결하기 위해, 이 세 바이러스를 동시에 검출하기 위한 세 가지 구별되는 형광 탐침 세트를 사용하는 신규 트리플렉스 디지털 PCR(ddPCR) 분석법을 개발하였습니다. 이 멀티플렉스 ddPCR은 높은 특이성, 민감성 및 재현성을 자랑하는 뛰어난 분석 성능을 보여주었습니다. 기존의 정량적 PCR(qPCR)과 비교할 때 ddPCR은 ASFV, PRV 및 PPV 각각에 대해 0.08, 3.41 및 3.38 복사본/μL의 검출 한계(LOD)를 달성했으며, 이는 대응되는 qPCR 방법보다 약 10배 낮은 LOD 값을 나타냅니다. 교차 반응성 테스트에서는 다른 중요한 돼지 병원체에 대한 절대적인 특이성을 확인했습니다. 217개의 현장 샘플을 사용한 임상 검증에서는 ddPCR이 양성 사례를 137개 샘플(63.1%)에서 검출한 반면 qPCR은 115개(53.0%)에서 검출하여 현저한 진단상의 장점을 보여주었습니다. 종별 양성률은 ddPCR이 ASFV 5.99%, PRV 0.46%, PPV 3.69%를 통해 qPCR 대비 개선된 검출 능력을 보여주었습니다. 일치도 분석에서는 방법 간 높은 일치도(94.01-99.54%)를 나타냈으며, ddPCR은 특히 낮은 바이러스 양의 샘플에 대해 뛰어난 민감성을 보여주었습니다. 이 연구는 ASFV, PRV 및 PPV의 동시 구별 진단을 위한 최초의 멀티플렉스 디지털 PCR 플랫폼을 확립했으며, 돼지 집단에서 이 경제적으로 중요한 병원체에 대한 향상된 감시 및 제어를 위한 강력한 도구를 제공합니다.