살아있는 약독화 살모넬라 엔테리카 콜레라시우이스(S. Choleraesuis) 균주는, 잘 특성화된 병원성과 강한 면역원을 갖춘 돼지에 적응한 병원체로서 생생균 백신을 구성하는 데 합리적인 선택입니다. CRISPR-Cas9을 사용하여 균형 잡힌 약독화와 면역원성을 확보하기 위해, SPI-2 T3SS의 핵심 구성 요소인 ssaV 유전자를 제거하여 백신 후보를 구축했습니다. 이 돌연변이체는 상피세포에 부착하고 침입하는 능력은 유지했지만 대식세포 내 생존이 현저히 감소했으며, 이는 SPI-2 의존적 지속성이 손상된 것을 나타냅니다. ∆ssaV 돌연변이체는 LD50 값이 1000배 이상 증가하고, 급속한 전신 제거가 나타나, 현저한 약독화 및 효율적인 체내 제거를 입증했습니다. ∆ssaV 돌연변이 백신은 마우스에서 강력한 체액 및 세포 면역 반응을 유도하였으며, 야생형(WT) 균주와의 치명적 도전에서 70%의 생존율을 달성했습니다. 이러한 결과는 ssaV 유전자 삭제가 약독화, 면역원성 및 자가 제한성을 가진, 합리적으로 설계된 백신 균주를 생성하며 마우스 모델에서 유망한 살아있는 백신 후보임을 보여줍니다.