아프리카돼지열병(ASF)은 돼지의 매우 전염성이 강하고 치명적인 출혈성 질병입니다. 베트남과 필리핀에서는 백신이 허가를 받았지만, 전 세계적으로 충분한 대규모 안전성 및 효능 검증이 이루어지지 않아 신속하고 신뢰성 있는 진단 검사가 효과적인 예방 및 통제를 위해 필수적입니다. 본 연구에서는 정보학을 활용하여 4개의 주요 아프리카돼지열병 바이러스(ASFV) 구조 단백질인 p30, p54, p72 및 pA104R에서 15개의 보존된 B-세포 에피토프를 예측하고 선택하여 다에피토프 항원(MEA)을 합리적으로 설계하였습니다. 재조합 MEA는 대장균에서 발현되고, 서양 블롯과 간접 면역 형광 검사로 면역원성을 검증했습니다. 이 항원은 이후 간접 효소 결합 면역 흡착 검사(iELISA)의 기초로 사용되었으며, 반응 조건이 체계적으로 최적화되었습니다. iELISA의 최적 절단 값은 0.315로, 100개의 ASFV 음성 혈청 샘플 분석에서 결정되었습니다. 이 검사는 우수한 재현성을 나타내며, 검사의 변동 계수가 10% 이하로 나타났고, 다른 일반적인 돼지 바이러스에 대해 양성 반응을 보인 혈청과의 교차 반응성이 없어서 높은 특이성을 보였습니다. 이 개발된 검사는 높은 민감성을 나타내며, 혈청 샘플 최대 1:6,400 희석에서도 ASFV 항체를 검출할 수 있습니다. 또한 순환하는 Genotype II 감염 지역의 임상 샘플을 검증할 때 두 개의 상업적인 ELISA 키트보다 우수한 민감성을 나타냈습니다. 이러한 결과는 ASFV 항체 검출을 위한 민감하고 특이적인 iELISA의 성공적인 개발을 강조하며, 이는 대규모 역학적 감시와 ASF 통제 전략의 시행에 귀중한 새로운 도구를 제공합니다.